超高分辨率 显微成像系统iSTORM 活细胞版
超高分辨率显微成像系统iSTORM ，综合运用了 TIRF、dSTORM、STORM、PALM等多种成像技术，得到了超高分辨率、超稳定、超便捷的成像方法，成功实现了光学显微镜对衍射极限的突破，使得在 20nm的分辨率尺度上从事生物大分子的单分子定位与计数、亚细胞及超分子结构解析、生物大分子生物动力学等研究成为现实，给生命科学、医学等领域带来重大突破。超高分辨率显微成像系统 iSTORM 具有 20 nm超高分辨率、3通道同时成像、3D同步拍摄、实时重构、2小时新手掌握等特点，并提供荧光染料选择、样本制备、成像服务与实验方案整体解决方案，以纳米级观测精度、高稳定性、广泛环境适用、快速成像、简易操作等优异特性，获得了超过50家科研小组和100多位科研人员的高度认可。欢迎预约试拍！联系电话0512-81868806 17788523055。
成功实现2014年诺贝尔化学奖-随机光学重建STORM技术原理的产业化，加入柱面镜设计，在XY轴分辨率达20nm、Z 轴分辨率达 50nm，突破衍射极限，实现3D成像功能。
采用专有的多通道同时成像的光路设计，提供稳定的光路。自主开发的成像分光光路，可保证通道间的光学路径相对独立，使得样品发出的荧光最大效率地被探测器接收，最大限度降低通道间的串扰。并配合以最佳染料方案和最佳成像缓冲液配方，以多通道同时成像的方式，在几分钟到十几分钟的时间范围内实现 20nm 的超高分辨率成像。
采用标准的样品制备以及缓冲液配方protocol，解决了超高拍摄样品难以制备的问题，经过优化的样本制备方案，仅需3步即可上机检测，“傻瓜式”操作，易学易用，新手2个小时简单培训即可上机获得理想的超高分辨率显微成像结果。
采用纳米级实时动态锁定技术，以实时物理补偿方式纠正样品漂移，无需预热、即开即用、操作简便，免受如气流、温度变化、噪音、机械振动等环境问题对样品位置的影响，在高楼层、嘈杂、震动、常温常态的环境下也能稳定成像，具有高效、简便、对环境适应性好的特性，非常友好易用。
细胞端粒 DNA 结构的三维超高分辨率成像。图 (a) 为宽场成像，显示细胞核内端粒 DNA 形成 foci; 图 (b) 和 (c) 为图 (a) 所框 foci 的 三维超高分辨率图像，显示宽场的一个 foci 实际包含多个小的 foci, 超高分辨率成像提供了精细的结构信息，有助于对结构变化的观察。
小鼠脑切片神经突触的超高分辨率成像。图 (a)、(c) 和 (e) 显示宽场成像无法提供精细的结构信息；图 (b)、(d) and (f) 是威斯尼斯人wns888入口科 技双通道超高分辨率显微镜提供的超高分辨率图像，突触前膜和突触后膜的结构清晰可辨。
Hela 细胞中顺式高尔基体网络蛋白 GM 130 和反式高尔基体 网络蛋白 Golgin 97 的双通道超高分辨率成像。（a）宽场成像显 示两个蛋白局部重叠；（b）超高分辨率成像清晰显示两个蛋白分 别位于高尔基体的两个层面。
COS-7 细胞中线粒体的三维超高分辨率成像。线粒体外膜蛋 白 Tom20 采用间接免疫荧光标记。外膜蛋白勾勒的线粒体呈中空 结构，宽场成像或共聚焦显微镜成像难以捕捉如此清晰的结构特 征。z 轴的位置信息用颜色梯度表示。
酵母细胞中纺锤极体的微管蛋白 Tub1 和 Tub4 的双通道超 高分辨率成像，两种蛋白分布构建了 GFP 和 RFP 的重组蛋白，再 用 GFP 纳米抗体和 RFP 纳米抗体分别进行免疫荧光染色。图（a） 和图（b) 为宽场成像，图（c) 和图（d）为相应的超高分辨率成像。 图（b) 为图（a) 所框区域的放大，相应的超高分辨率图像（d) 清 晰显示纺锤微管蛋白锚定到纺锤极体。
威斯尼斯人wns888入口科技三通道超高分辨率成像。图 (a) 为 COS7 细胞的线粒体外膜蛋白 TOM20（紫色）、线粒体基质蛋白 COX IV（蓝色）和 高尔基体 TGN46（绿色）的超高分辨率成像。图 (b) 为 COS7 细胞的线粒体外膜蛋白 TOM20（红色）、核膜蛋白 lamin（蓝色）和高尔 基体蛋白 TGN46（绿色）的超高分辨率成像。
“将传统的能够准确标记细胞内多种大分子的免疫组织化学染色技术与多色三维随机光学重构超分辨率显微镜（3D-dSTORM）结合，使对细胞壁多糖高灵敏度、高分辨率成像成为可能。”
| iSTORM 超高分辨率显微成像系统 | ||
| XY 分辨率 | ~20nm由主动式锁定系统稳控 | |
| Z 分辨率 | ~50nm由自动对焦稳控 | |
| TIRF功能 | 完全集成，TIRF/HILO/EPI照明方式可方便调节 |
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| 多通道成像 | 匹配 单/双/三 通道同时成像 | |
| 主动式锁定系统 | Luna 1 nm精度漂移补偿完全自动化 | |
| 图像处理 | 多通道超高分辨率图像实时重构显示 | |
| 可使用荧光染料 |
特制成像缓冲液实现双色以及双/三色通道成像 推荐使用：CF568，Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 750 |
其他可使用染料及荧光蛋白 |
| 软件Serendipity |
系统控制：照明系统，主动锁定系统（LUNA)，TIRF电动调节系统 图像显示：明场图像显示，宽场图像显示，超高图像显示 图像采集 超高分辨图像重构 图像分析处理 |
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技术无法对比，需要根据具体应用场景具体分析，STORM空间分辨率高，SIM时间分辨率高。
具体损伤不好量化，但iSTORM可以进行活细胞成像.
抗体 病毒 核糖体。
扁平细胞更适合，但是不绝对，厚的细胞或者组织切片也可以拍超高。
（1）照明锁定系统的照明部分：使用功率1w，波长455nm的科勒照明系统，明场照明波段与荧光照明波长和成像波段不重合；
（2）照明锁定系统的玻片部分：使用融化在玻片上的塑料小球，保证和样品之间没有相对移动；
（3）照明锁定系统的锁定部分：采用PI压电陶瓷平台，精度1nm，位移范围200um，实现精确校正样本漂移量。
iSTORM超高TIRF系统是将波长为561nm、647nm、750nm的激光光纤接入TIRF模块，通过步进电机驱动器调节激光位置，实现激光照明光路Epi、HILO和Tir三种照明，在Tir处精调驱动器找到最佳成像位置。
所使用相机主要参数：sCMOS四百万像素，2048x2048，pixel6.5um，成像有效面积13.3x13.3mm，帧率30fps，极限帧率100fps（搭配PCIe），量子效率82%@560nm。
水平方向20nm，垂直（z）方向50nm，三通道每个区域像素：738x345，每个通道视野范围：48x22um，垂直（z）方向成像范围1000nm。
威斯尼斯人wns888入口科技的iSTORM超高显微镜可实现3通道同时成像，分别是561、656、750三个通道，每通道激光照明功率不低于150mW，可实现0~100%调节。
威斯尼斯人wns888入口科技的iSTORM超高显微镜系统包含以下模块：显微镜主体、三色成像系统、TIRF系统、激光和控制器系统、成像工作站。
可以的，可以使用商用显微镜的锁焦系统，z方向锁焦精度在20-50nm；使用威斯尼斯人wns888三维锁定系统，z方向锁定精度可以达到5nm。
算法经过优化后，iSTORM超高图像可以实现实时重构，立等可得。
使用物理锁定的方式，实时追踪样品上的一个基准点的位置，并根据此移动样品位置，补偿样品漂移。因为基准点可以在样品制备之前加入，并且在成像过程中亮度保持稳定，所以不会增加样品制备的复杂性，可以在整个成像过程中保持样品位置稳定在1nm左右。
根据样品及结构的不同，成像时间也不同。结构比较复杂的固定细胞可能要几分钟到十几分钟，活细胞成像最快可以几秒钟完成。
使用配置中的缓冲液和染料及照明光配合，可以使样品上标记的荧光染料“闪烁”，使得原始图像上可以获得单分子的荧光染料图像，之后通过单分子定位原理，对每个亮点进行位置拟合，并记录在超高成像结果中。单个荧光点的定位精度与拍摄中获得的荧光点光子数目有关系，一般情况下可以将分辨率提升10倍。
可以先用宽场成像，对样品整体进行快速扫描，找到目标细胞后进行超高成像。
针对固定的细胞我们有专用的双通道和三通道成像缓冲液试剂盒，进行单独售卖。
正常情况下，以双通道为例，曝光时间30ms, 一边拍以便进行实时重构，拍摄10000帧需要8--10min左右。如果先拍照后分析，曝光时间10ms为例，拍摄10000帧需要1min40s左右。
样品最好是染色完成后,及时进行拍照，样本来不及拍照可以避光保存在4℃，保存时间不超过3天。
由于威斯尼斯人wns888入口科技的iSTORM产品所具备的20nm超高分辨率、2-3通道同时成像、界面友好、简单易用、系统稳定性好、环境适应性高等综合特点和优势，使得它能够帮助到更多科学家进行衍射极限尺度以下的生物分子组织与相互作用等的尖端科学研究，已为包括香港科技大学、香港大学、中山大学、深圳大学、北京大学医学院等在内等超过50家科研小组和100位科研人员的科学研究的提供帮助，并获得了高度认可。
iSTORM技术采用在特定成像缓冲液中具有光切换特性的有机染料。理论上，与激光器波长兼容的光切换染料均适用。但是，用户应该严格测试染料的光切换特性，例如染料在成像缓冲液中的亮/暗工作周期。每个周期释放出的光子越多、亮/暗工作周期越低、切换次数越多的染料越合适。本手册中提供的样品制备方案均采用Alexa FluorÒ 647 和Alexa FluorÒ 750这一对荧光染料，这是目前最适合iSTORM双通道成像系统的选择。如果实验仅需要观察一个目标（即单通道），Alexa FluorÒ 647是首选，因为相比Alexa FluorÒ 750，Alexa FluorÒ 647 每个切换周期释放出更多的光子，且具有更短的工作周期。
此外，诸如蓝色吸收染料（Atto 488、Alexa 488、Atto 520）、黄色吸收染料Cy3B、红色吸收染料（Alexa 647、Cy5、Dyomics 654、Atto 680）和近红外吸收Alexa 750等染料也都可以用来超高成像。
对生物结构进行特异性标记可通过免疫染色（直接免疫染色法或间接免疫染色法）且以光切换染料标记，也可以通过多肽或酶体（例如商业化产品SNAP-tag, CLIP-tag, 等等）标记目标蛋白。
适用于iSTORM系统的二抗已经商业化且已被广泛使用。用户也可以考虑对一抗、FAB片段或者纳米抗体进行荧光标记，由于荧光分子距离目标蛋白更近，所以蛋白定位相比间接免疫荧光标记法更加准确。
iSTORM超高分辨率显微镜主要适用于实验室、研究所及医院的实验与观察。样品广泛适用于分子细胞生物学、神经生物学、免疫学、药理学等领域内固定的细胞、组织、细菌、酵母和病毒的研究，iSTORM活细胞版也可以进行活细胞的相关成像。
荧光染料被激发进入发射态，之后会进入暗态（Dark state），在暗态中它们将与自由氧结合，进入漂白状态。在漂白状态下，染料不会再次发出荧光。如果不让染料与自由氧结合，它将无法进入漂白状态，一直维持在暗态。高功率的激发光可以使染料从暗态再次进入发射态。这种从亮到暗再到亮的状态切换看起来就像是染料在“闪烁”一样。STORM通过随机的分批“点亮”目标分子来进行超分辨定位。这样每个活跃的荧光集团都被分辨，它们的图像与其他分子分开，不重叠。这样确定了基团的准确位置，多次重复这个过程，每次随机打开荧光基团的不同亚基，得到图像，确定每个亚基的位置后，把以上图像重建成一张超高分辨率图像。
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